008111227s2011    kjka     t QC 000a  korIA
 056  ▼a520.7▼24
 090  ▼a520.7▼b농239ㅅ
 110  ▼a농림수산식품부▼b식품산업정책과
 24500▼a새송이버섯 유래 재조합 단백질을 이용한 기능성 식품 개발▼d농림수산식품부 식품산업정책과▼e조선대학교 산학협력단 [공편]
 260  ▼a[광주]▼b조선대학교 산학협력단▼c2011
 300  ▼a[206] p.▼b삽도▼c30 cm
 44000▼a최종연구보고서
 50000▼a연구책임자: 김성준
 50010▼a발간등록번호 : 11-1541000-001057-01
 504  ▼a참고문헌 : p.200-206
 7001 ▼a김성준
 710  ▼a조선대학교▼b산학협력단
 710  ▼a농림부
 710  ▼a농수산부
 710  ▼a농림수산부
 710  ▼a농림축산식품부
 856  ▼uhttp://library.mafra.go.kr/skyblueimage/3545
 9501 ▼a비매품

제1장  연구개발과제의 개요 = 27
 1절. 연구개발의 필요성 = 27
  1. 연구개발대상 기술의 경제적 · 산업적 중요성 및 연구개발의 필요성 = 27
   가. 재조합 유용단백질소재의 경제적 산업적 중요성 = 27
   나. 버섯을 이용한 재조합 유용단백질 생산기술 개발의 필요성(그림2) = 29
  2. 관련기술에 대한 연구팀의 선행연구결과 = 31
   가. 새송이버섯을 이용한 GUS 유전자발현 연구 = 31
   나. 항생제 marker를 이용한 형질전환버섯의 선별 = 32
   다. 형질전환버섯의 형질전환 유무검증 = 32
   라. 새송이 버섯에서 인체유래 단백질을 생산하기 위한 발현 백터의 구축 = 33
   마. 새송이 버섯에서 인체유래 단백질의 발현 = 34
 2절. 연구개발의 목표 및 내용 = 35
  1. 연구개발의 최종목표 및 성격 = 35
   가. 연구개발의 최종목표 = 35
   나. 연구개발의 성격 = 35
  2. 연차별 연구개발의 목표 및 내용 = 36

제2장  국내외 기술개발 현황 = 39
 1절. 세계적 수준 = 39
 2절. 국내수준 = 39
 3절. 국내·외의 연구현황 = 40
 
제3장  연구개발수행 내용 및 결과 = 41
 1절. 연구범위 및 연구수행 방법 = 41
  1. 1차년도(2008년) = 41
  2. 2차년도(2009년) = 42
  3. 3차년도(2010년) = 43
 2절. 연구개발의 추진 전략·방법 및 추진체계 = 44
  1. 연구개발의 추진 전략·방법 = 44
   가. 제1세부과제 : 유용 재조합단백질 생산 시스템 개발 = 44
   나. 제2세부과제 : 버섯 유용재조합 단백질 발현 시스템 개발 = 47
   다. 제3세부과제 : 버섯 유용 재조합 단백질 자실체 및 균사체 대향 배양 시스템 개발 = 49
  2. 연구개발의 추진체계 = 51
 3절. 연구개발결과 = 52
  1. 제1세부 과제 : 유용 재조합단백질 생산 시스템 개발(조선대학교) = 52
   가. 성장 호르몬(Growht Hormone) = 52
   나. 인터루킨32(Interleukin 32, IL-32) = 68
    (1) Beta-glucuronidase(GUS) assay = 68
    (2) 암 배양과 hygromycine(50 μg/ml) 함유 배지에서 수율 =  70
    (3) 형질전환 균사체 Genomic DNA 분리 = 72
    (4) 형질전환 균사체 확인 : Southern blot = 74
    (5) SDS PAGE = 76
    (6) 형질전환 균사체 protein level 발현확인 : Western blot = 78
    (7) biological activity of IL-32 = 79
     (가) MIP-2 = 79
     (나) TNF-alpha = 79
   다. hPDGF-BB = 82
    (1) PCR = 82
    (2) Sequencing = 84
    (3) Agrobacterium 형질전환 PCR = 86
    (4) 버섯 균사체 오염률과 발생률 = 88
    (5) GUS 활성의 조직화학적 분석 = 90
    (6) 형질전환 균사체의 유전자 도입 확인 = 92
    (7) Total RNA 분리 및 cDNA 합성과 유전자 도입 확인 = 94
    (8) 형질전환 균사체의 단백질 분리 및 분석 = 96
     (가) 단백질 정량 = 96
     (나) Western blot Purification 및 분석 = 97
     (9) Fusion Protein Purification 및 분석 = 99
     (10) MALDI-TOF mass spectrometry를 이용한 재조합 단백질의 질량분석 = 102
     (11) 재조합 단백질의 Bioactivity assay = 104
     (12) 형질전환 균사체에서 생산된 자실체의 분석 = 106
      (가) PCR analysis = 107
      (나) Southern blot analysis = 108
      (다) Total RNA analysis = 110
      (라) Western blot analysis = 111
   라. Secretion signal(a-factor) = 112
  2. 제1협동과제 : 버섯 유용재조합 단백질 발현 시스템 개발((주)캐러스) = 130
   (1) 버섯 특이적 프로모터 Tag 및 형질전환체 선별 = 130
   (2) 형질전환 버섯 게놈 DNA 추출 = 131
   (3) TAIL PCR of promoter tag = 131
   (4) TAIL PCR 개요 = 133
   (5) TAIL PCR 장점 = 133
   (6) TAIL PCR 중요한 특성 및 방법 = 133
   (7) 특이 프로모터 단편 클로닝 = 136
   (8) DNA 염기서열 분석 = 136
   (9) 결과 = 136
    (가) 버섯 promoter trap vector 제작 = 136
    (나) Promoter trap 형질전환체 선별 = 137
    (다) Strategies for isolating and cloning sequences flanking T-DNA = 138
    (라) Analysis of 5'-end cloning sequences flanking T-DNA = 141
   (10) α-factor vector construction = 141
  3. 제2협동과제 : 버섯 유용 재조합 단백질 자실체 및 균사체 대량 배양 시스템 개발(전북대학교) = 146
   가. 주요 연구내용 및 결과요약 = 146
    (1) 서론 = 146
    (2) 연구내용(재료 및 방법) = 147
     (가) 공시 균주 = 147
     (나) 액체 배지의 조제 = 148
     (다) 고체 배지의 조제 = 154
     (라) Chitin 함량분석 = 154
     (마) Ergosterol 함량분석 = 154
    (3) 결과 및 고찰 = 155
     (가) 균사체 생산 최적배지 조성 = 155
     (나) 곡물배지의 Chitin과 Ergosterol 정량에 의한 균체량 측정 = 157
     (다) 균사체 및 자실체 건조 회수량 = 159
    (4) 요약 = 167

제4장  목표달성도 및 관련분야에의 기여도 = 169
 1절. 연구개발목표의 달성도 및 관련분야의 기술발전에의 기여도 = 169
  
제5장  연구개발 성과 및 성과활용 계획 = 173
 1절. 연구개발 성과 = 173
  1. 학술발표 : 한국버섯학회 포스터 발표 = 173
  2. 수상 : 한구버섯학회 포스터 발표 우수상 수상 = 175
  3. 학술발표 : 일본분자생물학회 포스터 발표 = 176
  4. 특허출원 = 178
  5. 학위논문 = 190
  6. 연구개발결과의 성과 및 활용목표 대비 실적 = 191
   (1) 연구성과 목표 = 191
   (2) 연구성과 활용 = 191
   (3) 논문게재 성과 = 192
   (4) 특허 성과 = 196
   (5) 인력활용/양성 성과 = 196
   (6) 경제사회 파급효과 = 196
   7. 구매금액이 3천만원 이상인 기자재 구매현황 = 196
   8. 연구비 집행실적 = 197
   9. 중요 연구변경 사항 = 197

제6장  연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 = 198
 1절. 국내외 관련분야 환경변화 = 198

제7장  참고문헌 = 200